Peptidase

b. Take 1.00mL of each of the above personnel (parallel test is required), add 5.00mL of 0.4mol / L sodium carbonate solution, 1.00mL of Folin reagent use solution, place in a 40 ± 0.2 ℃ water bath for 20min, and take it out. Use a spectrophotometer at a wavelength of 680nm and 10mm cuvette. Take the "0" tube containing no tyrosine as blanks, and measure the absorbance respectively. Take the absorbance A as the ordinate and the tyrosine concentration c as the abscissa. , Draw a standard curve (this curve should pass the zero point).

According to the plot or the regression equation, the amount of tyrosine (ug) when the absorbance is 1 is calculated, which is the absorbance constant K value. Its K value should be in the range of 95-100.

2 Determination
(1) Preparation of Peptidase
a. Weigh 1~2g of enzyme powder, accurate to 0.0002g (or absorb 1.00mL of liquid enzyme), dissolve with a small amount of pH6.0 buffer solution, and grind it with a glass rod, then carefully pour the supernatant into a volumetric flask. Add a small amount of the above-mentioned buffer solution to the sediment to dissolve it, and grind it for 3 to 4 times, and finally transfer it all into a volumetric flask, make up to volume with the buffer solution, and shake well. Filter through four layers of gauze, and the filtrate is once again diluted to the appropriate concentration with a buffer according to the enzyme activity for measurement (diluted to the measured absorbance within the range of 0.25 to 0.40).
b. For the determination of enzyme powder, refer to Table A4 for the dilution factor (liquid enzyme can also refer to Table A4 for dilution).

(2) Measurement

a. First put the casein solution into a 40 ± 0.2 ℃ constant temperature water bath and preheat for 5min.
b. Follow the procedure below:
Test tube A (blank)
→ Add 1.00mL of enzyme solution (40 ± 0.2 ℃)
→ Add 2.00mL of trichloroacetic acid (shake well) (40 ± 0.2 ℃)
→ Add casein 1.00mL (shake well)
→ Take it out for 10 minutes and filter
→ take 1.00mL filtrate
→ Add sodium carbonate solution 5.00mL
→ 1.00 mL of Jiafulin reagent solution (40 ± 0.2 ℃, color development 20min)
→ At a wavelength of 680nm, measure its absorbance with a 10mm cuvette

Test tube B (enzyme sample, three parallel samples are required)
→ Add 1.00mL of enzyme solution (40 ± 0.2 ℃)
→ Add casein 1.00mL (shake well, react at 40 ± 0.2 ℃ for 10min)
→ Add 2.00mL of trichloroacetic acid (shake well)
→ Take it out for 10 minutes and filter
→ take 1.00mL filtrate
→ Add sodium carbonate solution 5.00mL
→ 1.00 mL of Jiafulin reagent solution (40 ± 0.2 ℃, color development 20min)
→ At a wavelength of 680nm, measure its absorbance with a 10mm cuvette

Calculation
X = A × K × 4/10 × n = 2/5 × A × K × n
In the formula:
X ---- enzyme activity of the sample, u / g (u / mL);
A ---- The average absorbance of the sample in parallel test;
K ---- absorption constant;
4 ---- the total volume of the reaction;
10 --- reaction time 10min, calculated as 1min;
n ---- Dilution multiple.

The result obtained is expressed as an integer.

The allowable difference between the results of parallel tests shall not exceed 3%.

CERTIFICATE OF ANALYSIS 

ຄໍານິຍາມຂອງ Peptidase

ຜົງ Enzyme 1g (ຫຼືທາດແຫຼວ 1mL), ໃນອັດຕາ 40„ ƒƒ, pH6.0, 1min hydrolyzes casein ເພື່ອຜະລິດ 1ros tyrosine ເປັນຫົວ ໜ່ວຍ ກິດຈະ ກຳ enzyme ໃນ u / g (u / mL).

ວິທີການປອມ

ຫຼັກການຂອງPeptidase
Peptidase hydrolyzes casein ຢູ່ໃນອຸນຫະພູມ 40 ° C ແລະ pH 6.0 ເພື່ອຜະລິດອາຊິດ amino ທີ່ບັນຈຸກຸ່ມ phenolic. ພາຍໃຕ້ເງື່ອນໄຂທີ່ເປັນດ່າງ, Folin reagent ຈະຖືກຫຼຸດລົງເປັນສີຟ້າແລະສີຟ້າສີຟ້າ. ວັດແທກດ້ວຍ spectrophotometer ແລະຄິດໄລ່. ກິດຈະ ກຳ ຂອງເອນໄຊຂອງມັນ.

Reagents ແລະວິທີແກ້ໄຂ
1 ການກະກຽມ Peptidase
ໃນອຸປະກອນ ສຳ ລັບຜະລິດຕະພັນອັດປາກມົດລູກ 2000 mL, ຕື່ມນ້ ຳ ເຂົ້າ sodium 100 g (Na2WO4 · 2H2O), ເກືອ molybdate 25 g (Na2MOO4 · 2H2O), ນ້ ຳ 700 ມລ, 50 ມລຂອງກົດ phosphoric 85%, ຄວາມເຂັ້ມ 100 ມລ. ອາຊິດໄຮໄຊໂຄລິກ, ຕົ້ມໃນໄລຍະຄວາມຮ້ອນຕໍ່າເປັນເວລາ 10 ຊົ່ວໂມງ, ເອົານ້ ຳ ເຢັນທີ່ເຢັນລົງມາໃສ່ໃນຮັດອາຍ, ຕື່ມ 50 ລິດຂອງລິດໄຮໂດລິກຊຽມ (LiSO4), ນ້ ຳ 50 ມລແລະນ້ ຳ ຢອດ ໜ້ອຍ ໜຶ່ງ ຢອດ (99%), ແລະຕົ້ມໃສ່ 15 ນາທີທີ່ຈະເອົາບຣູມລິນອອກເກີນ (ຕື່ມນ້ ຳ bromine ທີ່ມີສີຂຽວຫລັງຈາກເຮັດໃຫ້ເຢັນແລະຕົ້ມເລັກນ້ອຍເອົາ bromine ເກີນ), ເຢັນ, ຕື່ມນ້ ຳ ໃຫ້ປະລິມານເຖິງ 1000 ມລ, ປະສົມເຂົ້າກັນດີແລະກັ່ນຕອງ. ເຄື່ອງປະດັບຄວນເປັນສີເຫຼືອງທອງແລະເກັບຮັກສາໄວ້ໃນຂວດນ້ ຳ ຕານ.
ໃຊ້ວິທີແກ້ໄຂ: ປົນສ່ວນ ໜຶ່ງ ຂອງຟູອີນ Reagent ດ້ວຍສອງສ່ວນຂອງນ້ ຳ ແລະສັ່ນດີ.
2 ໂຊລູຊຽມ carbonate solution c (Na2CO3) = 0.4mol / L
ເອົາຄາບອນ sodium sodium ທີ່ບໍ່ມີນໍ້າມັນ 42,4 ກຼາມ, ລະລາຍໃນນໍ້າແລະເຮັດໃຫ້ສູງເຖິງ 1000 ມລ.
3 ກົດ Trichloroacetic c (CCL3 · COOH) = 0.4mol / L
ເອົາອາຊິດ trichloroacetic 65,4 g, ລະລາຍໃນນ້ ຳ ແລະເຮັດໃຫ້ສູງເຖິງ 1000 ມລ.
4 ໂຊດຽມໄຮໂດຼລິກແກ້ໄຂ c = 0.5mol / L
ກຽມພ້ອມຕາມ GB 601.
5 ການແກ້ໄຂອາຊິດໄຮໂດຼລິກຄ c = 1mol / L ແລະ 0.1mil / L
GB 601: ວັດແທກອາຊິດ hydrochloric 90mL, ຖອກໃສ່ນ້ ຳ 1000mL, ແລະສັ່ນເພື່ອໃຫ້ໄດ້ຮັບກົດ hydrochloric 1mol / L.
ວັດແທກອາຊິດ hydrochloric 9mL, ຖອກລົງໃນນ້ ຳ 1000mL, ແລະສັ່ນເພື່ອຮັບເອົາອາຊິດ hydrochloric 0.1mol / L.
6 ໂຊລູຊັ່ນ Buffer
buffer ຟອສເຟດ (pH = 6.0) ສຳ ລັບໂປຣຕີນລົດຊາດ
ມີນ້ ຳ ໜັກ 45.23 g ຂອງທາດ disodium hydrogen phosphate (Na2HPO4 · 12H2O) ແລະ 8.07 g ຂອງກົດ citric (C6H6O7 · H2O), ລະລາຍໃນນ້ ຳ ແລະເຮັດໃຫ້ເຖິງ 1000 mL. ຫຼັງຈາກການກະກຽມ, ໃຊ້ແມັດ pH ເພື່ອແກ້ໄຂມັນ.
ໂຊລູຊັ່ນ 7 10g / L casein (casein)
ນໍ້າ ໜັກ 1.000g ຂອງ casein, ຖືກຕ້ອງເຖິງ 0.001g, ປຽກດ້ວຍປະລິມານ ໜ້ອຍ 0.5mol / L ໂຊລູຊັ່ນໄຮໂດຼລິກ, ເພີ່ມປະມານ 80mL ຂອງ pH 6.0 buffer ປະມານ 80 ມລ, ແລະກະຕຸ້ນໃນຂະນະທີ່ອຸ່ນໃນບ່ອນອາບນໍ້າຈົນ ໝົດ ລະລາຍ. , ໂອນໄປທີ່ເຕົາໄຟປະລິມານ 100 ມລ, ແລະເຈືອຈາງກັບເຄື່ອງ ໝາຍ ດ້ວຍ pH 6.0 buffer. ວິທີແກ້ໄຂນີ້ແມ່ນເກັບໄວ້ໃນຕູ້ເຢັນເປັນເວລາ 3 ວັນ.
8 ແກ້ໄຂມາດຕະຖານ 100 100ug / mLL-tyrosine
ກ. ມີນ້ ຳ ໜັກ 0.1000 g ຂອງ L-tyrosine ແຫ້ງຈົນມີນ້ ຳ ໜັກ ຢູ່ທີ່ 105 ° C, ຖືກຕ້ອງເຖິງ 0.0002 ກຼາມ, ແລະລະລາຍດ້ວຍ 60 ມລຂອງ 1 ລິດ / ລິດອາຊິດ hydrochloric ເຮັດໃຫ້ສູງເຖິງ 100 ມລ.
ຂ. ທໍ່ຂະ ໜາດ 10.00 ມລຂອງວິທີແກ້ໄຂມາດຕະຖານ tyrosine 1 ມລ / ມລແລະເຮັດໃຫ້ສູງເຖິງ 100 ມລກັບກົດອາຊິດ hydrochloric 0.1 mol / L ເພື່ອໃຫ້ໄດ້ມາດຕະຖານ 100 ug / mLL-tyrosine.

ເຄື່ອງມືແລະອຸປະກອນຂອງ Peptidase
1 ອາບນ້ ຳ ອຸນຫະພູມຄົງທີ່: 40 ± 0.2 â„ ƒ
2 Spectrophotometer: ຄວນຕອບສະ ໜອງ ກັບຄວາມຕ້ອງການຂອງ GB 9721

ຂັ້ນຕອນການວິເຄາະຂອງ Peptidase
1 ຮູບແຕ້ມຂອງເສັ້ນໂຄ້ງມາດຕະຖານ
ກ. L-tyrosine ມາດຕະຖານການແກ້ໄຂ

ຕາຕະລາງ A3

ການຫຸ້ມຫໍ່ແລະການເກັບຮັກສາ

ຖົງຫຸ້ມຫໍ່ອາຫານແຂງ, 25 ກິໂລ / ຖັງ.

Peptidase ຄວນຈະເປັນ stored ໃນບ່ອນແຫ້ງ, ເຢັນແລະມີລົມລ່ວງດີຫ່າງຈາກແສງແດດ, ຄວາມຮ້ອນ.

ການຈ່າຍເງິນ:T / T, Paypal, Western Union, ການຮັບປະກັນດ້ານການຄ້າຂອງ Alibaba, VISA, MasterCard, ການກວດສອບອີເລັກໂທຣນິກ, ການຈ່າຍເງິນຕໍ່ມາ, LC ແລະອື່ນໆ.