Nattokinase

ຫຼັກການ

Nattokinase ເຮັດຫນ້າທີ່ກ່ຽວກັບ fibrin, ທໍາລາຍການເຊື່ອມໂຍງ peptide, ແລະປະກອບເປັນຜະລິດຕະພັນລະລາຍອາຊິດໂມເລກຸນຕ່ໍາ, ເຊິ່ງຖືກວັດແທກໂດຍ spectrophotometer.

ໜ່ວຍ ກິດຈະ ກຳ ໜຶ່ງ ຂອງ fibrinolityc (FU) ຖືກ ກຳ ນົດເປັນ ຈຳ ນວນຂອງເອນໄຊ, ເຊິ່ງຈະຊ່ວຍເພີ່ມການດູດຊືມຂອງນ້ ຳ ໃນອັດຕາ 275nm ໂດຍ 0.01 ຕໍ່ນາທີພາຍໃຕ້ເງື່ອນໄຂທີ່ລະບຸໄວ້ໃນຂັ້ນຕອນ.

REAGENTS ຂອງ Nattokinase
1.0.05M Borate Buffer (pH 8.5) - ລະລາຍທາດ Sodium Borate 9.54 g (Na2B4O710H2O) ແລະທາດ Sodium Chloride (NaCl) 4,5 g ໃນນ້ ຳ DI ປະມານ 200 ml. ປັບ pH ໃຫ້ເປັນ 8,5 ດ້ວຍ 1N HCl ແລະເພີ່ມນ້ ຳ DI ເພື່ອໃຫ້ 500 ml.
2.0.2N TCA - ລະລາຍ 8.17 g ຂອງ Trichloroacetic Acid (CCl3CO2H) ໃນນ້ ຳ DI ເພື່ອເຮັດໃຫ້ 250 ml.
3.Thrombin Solution - ການໃຊ້ເຂັມສັກຢາ, ສັກ 5,0 ມລຂອງ 0.05M Borate Buffer ໃນຂວດ Thrombin (Sigma, T-6634). stir ມັນຄ່ອຍໆເພື່ອເຮັດໃຫ້ລະລາຍຫມົດ. ດ້ວຍເຂັມຂັດ, ໂອນຂະ ໜາດ 1 ມລກໃສ່ແກ້ວພລາສຕິກ (100 ໜ່ວຍ / ຫຼອດ) ແລະແຊ່ໄວ້ໃນບ່ອນເກັບມ້ຽນ.
* ໃນຊ່ວງເວລາຂອງການ ນຳ ໃຊ້ເຈືອຈາງເນື້ອໃນຂອງຂວດ ໜຶ່ງ ເຖິງ 4 ມລຂອງ 0.05 M Borate Buffer ແລະປົນກັບປາຍທໍ່ (ໃຊ້ປາຍດຽວກັນນີ້ເມື່ອປະຕິບັດການສະແດງ) ເພື່ອໃຫ້ໄດ້ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນສຸດທ້າຍ 20 U / ml. ໃຫ້ແນ່ໃຈວ່າມັນຖືກລະລາຍຫມົດ.

4.Acetate Solution (pH 6.0) - ລະລາຍ 12.96 g ຂອງໂຊດຽມ Acetate, Anhydrous (CH3CO2Na) ໃນນ້ ຳ DI, ເພີ່ມ 2,38 ml ຂອງວິທີແກ້ໄຂ Acid Acid Acid ແລະລະລາຍໃຫ້ 100 ml ກັບນ້ ຳ DI.

10% Triton X-100 - ລະລາຍ 5,0 g ຂອງ Triton X-100 (t-Octylphenoxypolyethoxyethanol) ໃນນ້ ຳ DI ດ້ວຍຄວາມຮ້ອນແລະເພີ່ມນ້ ຳ DI ເຮັດໃຫ້ 50 ml. ເກັບຮັກສາໄວ້ໃນຂວດສີນ້ ຳ ຕານ.

5.Enzyme Diluent - ລະລາຍ 0.344 g ຂອງແຄວຊຽມ Sulfate, Dihydrate (CaSO42H2O) ແລະທາດ Chodide Chloride 0.585 g ໃນນ້ ຳ DI, ເພີ່ມທາດ Acetate Solution 2.0 ml, ແລະ 0.5 ml ຂອງ Triton Solution 10%, ແລະນ້ ຳ DI ເພື່ອຜະລິດ 1 ລິດ.

6.Fibrinogen Substrate - ຕື່ມ 10.0 ml ຂອງ 0.05 M Borate Buffer ເຖິງ 96.0 ມລກຂອງ Fibrinogen (Sigma, Fraction I type I-S, F8630) ເທື່ອລະເລັກເທື່ອລະ ໜ້ອຍ ດ້ວຍການກະຕຸ້ນທີ່ອ່ອນໂຍນ, ແລະລະລາຍໃນເຕົາ 50 ມລ. ການກະກຽມສົດປະຈໍາວັນ (* 1)

                                                                 

ການກະກຽມແກ້ໄຂບັນດາຕົວຢ່າງຂອງຕົວຢ່າງ
ຖອກຕົວຢ່າງກັບ Enzyme Diluent ເພື່ອໃຫ້ສານດູດຊືມທີ່ຖືກຕ້ອງ (∠† A) ຂອງການກັ່ນຕອງລະຫວ່າງ 0.04 ແລະ 0.08 ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນແມ່ນປົກກະຕິ 0.67 ເຖິງ 1,33 FU / ml

ລະບຽບການຂອງ Nattokinase

1.Pipet 1.4 ml ຂອງ Borate Buffer ແລະ 0.4 ມລຂອງການແກ້ໄຂບັນຈຸ Fibrinogen ເຂົ້າໄປໃນທໍ່ centrifuge ທີ່ເຫມາະສົມ, vortex ແລະບ່ອນຢູ່ໃນອາບນ້ ຳ 37ºCເປັນເວລາ 5 ນາທີ.
2. ເພີ່ມຢ່າງລະອຽດ 0.1 ml ຂອງ Thrombin Solution ແລະປະສົມເຂົ້າກັນຢ່າງຖືກຕ້ອງໃສ່ vortex.
3. ຫຼັງຈາກ 10 ນາທີຢ່າງແທ້ຈິງ, ເພີ່ມ 0,1 ມລຂອງໂຊລູຊັ່ນຕົວຢ່າງ Enzyme, ປະສົມ 5 ວິນາທີ, ແລະເຜົາຢູ່ທີ່37ºC.
4. ຫລັງຈາກ 20 ແລະ 40 ນາທີນັບຈາກເວລາທີ່ຕິກິຣິຍາເລີ່ມຕົ້ນ, ປະສົມ 5 ວິນາທີຕາມ ລຳ ດັບ.
5. ຫລັງຈາກນັ້ນປະມານ 60 ນາທີ, ຕື່ມ 2 ml ຂອງ TCA ເພື່ອຢຸດຕິກິລິຍາ, ປະສົມແລະໃສ່ບ່ອນທີ່37ºCໃນອີກ 20 ນາທີ.
6.Centrifuge ທີ່ 5,000 rpm ເປັນເວລາ 15 ນາທີ.

7.Pipet 1 ml ຂອງ supernatant ຢ່າງລະມັດລະວັງເຂົ້າໄປໃນ QUARTZ cuvette ທີ່ມີທໍ່ Pasteur ແລະອ່ານຄວາມດູດຊືມ (As) ທີ່ 275 nm.

ຂອບໃຈ
1.Pipet 1.4 ml ຂອງ Borate Buffer ແລະ 0,4 ມລຂອງການແກ້ໄຂບັນຈຸ Fibrinogen ເຂົ້າໄປໃນທໍ່ທົດສອບທີ່ເຮັດໃຫ້ສູນກາງ, ແລະໃສ່ໃນອາບນ້ ຳ 37ºCເປັນເວລາ 5 ນາທີ.
2. ເພີ່ມຂະ ໜາດ 0,1 ml ຂອງວິທີແກ້ໄຂ Thrombin ແລະ vortex.
3. ຫຼັງຈາກ 10 ນາທີຢ່າງແນ່ນອນ, ຕື່ມ 2 ml ຂອງ TCA solution ແລະປະສົມ 5 ວິນາທີ.
4. ເພີ່ມຕົວຢ່າງ 0.1 ml ເຂົ້າໃນການແກ້ໄຂ, ປະສົມ 5 ວິນາທີ, ແລະອົບທີ່37ºCໃນເວລາປະມານ 20 ນາທີ.
5.Centrifuge ທີ່ 5,000 rpm ເປັນເວລາ 15 ນາທີ.
6.Pipet 1 ml ຂອງ supernatant ຢ່າງລະມັດລະວັງເຂົ້າໄປໃນ QUARTZ cuvette ທີ່ມີທໍ່ Pasteur ແລະອ່ານຄວາມດູດຊຶມທີ່ (Ab) 275 nm. (* 2)

ການຄິດໄລ່
(ເປັນ - Ab) 1 1
FU / g = _____________ x ________ x _______ x D
0.01 60 0.1

D = ປັດໄຈລະລາຍ (1 / ນ້ ຳ ໜັກ (g / ມລ)

ການຄົ້ນຄ້ວາພິສູດ

ການຫຸ້ມຫໍ່ແລະການເກັບຮັກສາ

ຖົງຫຸ້ມຫໍ່ອາຫານແຂງ, 25 ກິໂລ / ຖັງ.

Nattokinase ຄວນເກັບມ້ຽນໄວ້ໃນບ່ອນແຫ້ງ, ເຢັນແລະມີອາກາດຖ່າຍເທດີຫ່າງຈາກແສງແດດ, ຄວາມຮ້ອນ.

ການຈ່າຍເງິນ:T / T, Paypal, Western Union, ການຮັບປະກັນດ້ານການຄ້າຂອງ Alibaba, VISA, MasterCard, ການກວດສອບອີເລັກໂທຣນິກ, ການຈ່າຍເງິນຕໍ່ມາ, LC ແລະອື່ນໆ.