Alkaline Protease

ການສະ ໝັກ ແລະຫຼັກການ

ທາດໂປຼຕີນທີ່ເປັນດ່າງນີ້ຖືກໃຊ້ເພື່ອ ກຳ ນົດກິດຈະ ກຳ ຂອງໂປຣແກຣມ protease ເຊິ່ງສະແດງອອກເປັນຫົວ ໜ່ວຍ ຄອມພີວເຕີ້ຂອງການກະກຽມທີ່ມາຈາກ Bacillus subtilis var. ແລະ Bacillus licheniformis var. ການຍຶດເອົາແມ່ນອີງໃສ່ລະດັບຄວາມກົດດັນຂອງ hydrolysis ຂອງທາດໂປຼຕີນຈາກ casein 30 ນາທີໃນອຸນຫະພູມ 37 °ແລະ pH 7.0. casein ທີ່ຂາດສານອາຫານແມ່ນຖືກ ກຳ ຈັດດ້ວຍການກັ່ນຕອງ, ແລະ casein ທີ່ລະລາຍແມ່ນຖືກ ກຳ ນົດໂດຍ spectrophotometrically.

Reagents ແລະວິທີແກ້ໄຂຂອງທາດໂປຼຕີນຈາກ Alkaline
Casein ໃຊ້ກໍລະນີ Hammarsten-grade (ບໍລິສັດຊີວະເຄມີສາດສະຫະລັດ, ລາຍການເລກທີ 12840, ຫຼືທຽບເທົ່າ).
Tris Buffer (pH 7.0) ລະລາຍ 12.1 g ຂອງທາດ enzyme-grade (ຫຼືທຽບເທົ່າ) tris (hydroxymethyl) aminomethane ໃນນ້ ຳ 800 ມລ, ແລະຄ່າສ່ວນສິບກັບ 1 N hydrochloric acid ເຖິງ pH 7.0. ໂອນເຂົ້າໄປໃນເຕົາຂວດປະລິມານ 1000 ມລ, ເຈືອຈາງລົງປະລິມານດ້ວຍນ້ ຳ, ແລະປະສົມເຂົ້າກັນ.
TCA Solution ລະລາຍ 18 g ຂອງກົດ trichloroacetic ແລະ gri sodium acetate trihydrate 19 g ໃນນ້ ຳ 800 ມລໃນຖັງ volumetric ຂະ ໜາດ 1000 ມລ, ຕື່ມ 20 ມລຂອງອາຊິດຊິລິກ glacial, ເຈືອຈາງປະລິມານດ້ວຍນ້ ຳ, ແລະປະສົມ.
ໂຊລູຊູນໂຊຊຽມລະລາຍ 6.05 g ຂອງທາດ enzyme-grade tris (hydroxymethyl) aminomethane ໃນນ້ ຳ 500 ມລ, ຕື່ມນ້ ຳ 8 ມລຂອງ 1 ອາຊິດ hydrochloric, ແລະປະສົມ. ເຮັດໃຫ້ລະລາຍ 7 ກຣາມຂອງ Casein ໃນການແກ້ໄຂບັນຫານີ້, ແລະໃຫ້ຄວາມຮ້ອນປະມານ 30 ນາທີໃນການອາບນ້ ຳ ທີ່ຕົ້ມ, ບາງຄັ້ງຄາວ.
ເຮັດໃຫ້ເຢັນໃນອຸນຫະພູມໃນຫ້ອງ, ແລະປັບຕົວເຂົ້າກັບ pH 7.0 ດ້ວຍກົດ 0.2 N hydrochloric, ເພີ່ມກົດຊ້າໆ, ມີແຮງກະຕຸ້ນ, ເພື່ອປ້ອງກັນບໍ່ໃຫ້ຝົນຕົກຂອງ casein. ໂອນປະສົມເຂົ້າໄປໃນເຕົາປະລິມານໄຟຟ້າຂະ ໜາດ 1000 ມລ, ເຈືອຈາງລົງໃສ່ປະລິມານດ້ວຍນ້ ຳ, ແລະປະສົມເຂົ້າກັນ.

ການກະກຽມຕົວຢ່າງການ ນຳ ໃຊ້ Tris Buffer, ກຽມວິທີແກ້ໄຂຂອງການກຽມຕົວທາດ enzyme ເພື່ອໃຫ້ 2 ml ຂອງການລະລາຍສຸດທ້າຍຈະບັນຈຸຫົວ ໜ່ວຍ ປ້ອງກັນເຊື້ອແບັກທີເຣັຍລະຫວ່າງ 10 ແລະ 44.

ຂັ້ນຕອນຂອງທາດໂປຼຕີນຈາກ Alkaline
ທໍ່ 10.0 ມລຂອງໂຊລູຊັ່ນ Substrate Solution ເຂົ້າໄປໃນແຕ່ລະຊຸດຂອງທໍ່ທົດສອບຂະ ໜາດ 25-, 150 ມມ, ຊ່ວຍໃຫ້ທໍ່ທົດລອງ ໜຶ່ງ ຂອງແຕ່ລະ Enzyme, ໜຶ່ງ ທໍ່ ສຳ ລັບແຕ່ລະ enzyme ເປົ່າ, ແລະອີກທໍ່ ໜຶ່ງ ສຳ ລັບຊັ້ນຍ່ອຍ. ປະສົມທໍ່ນ້ ຳ ໃຫ້ພໍດີປະມານ 15 ນາທີໃນການອາບນ້ ຳ ທີ່ຮັກສາໄວ້ທີ່ 37 °± 0.1 °.
ເລີ່ມໂມງຢຸດໃນເວລາສູນ, ສົ່ງຢ່າງໄວວາກະແສໄຟຟ້າ 2.0 ມລຂອງການກະກຽມຕົວຢ່າງເຂົ້າໄປໃນຊັ້ນຍ່ອຍທີ່ມີຄວາມສົມດຸນ. ປະສົມ, ແລະທົດແທນທໍ່ໃນອາບນ້ໍາ. ຕື່ມນ້ ຳ ໜັກ 2 ມິລີລິດຂອງ Tris Buffer (ແທນທີ່ການກະກຽມຕົວຢ່າງ) ໃສ່ໃນຊັ້ນຮອງ. ຫຼັງຈາກທີ່ໃຊ້ເວລາປະມານ 30 ນາທີ, ຕື່ມ 10 ມິລິລິດລ໌ຂອງ TCA Solution ໃນແຕ່ລະບ່ອນທີ່ມີທາດ enzyme ແລະຢູ່ໃນຊັ້ນອະນຸບານເພື່ອຢຸດຕິກິລິຍາ ເຮັດຄວາມຮ້ອນໃຫ້ທໍ່ໃນນ້ ຳ ໃນເວລາປະມານ 30 ນາທີເພື່ອໃຫ້ທາດໂປຼຕີນແຂງແຮງສົມບູນ.
ໃນຕອນທ້າຍຂອງໄລຍະການໃຫ້ຄວາມຮ້ອນຄັ້ງທີສອງ, ສັ່ນທໍ່ແຕ່ລະທໍ່ຢ່າງແຮງ, ແລະກັ່ນຕອງຜ່ານ 11 ຊຕມ Whatman No. 42, ຫຼືທຽບເທົ່າ, ເຈ້ຍກັ່ນຕອງ, ຖິ້ມ 3 ມລ ທຳ ອິດຂອງການກັ່ນຕອງ.
[ໝາຍ ເຫດ: ເຄື່ອງຕອງນ້ ຳ ຕ້ອງມີຄວາມຊັດເຈນຢ່າງສົມບູນ.]
ກຳ ນົດການດູດຊືມຂອງຕົວກອງແຕ່ລະຕົວໃນຫ້ອງ 1 ຊມ, ຢູ່ທີ່ 275 nm, ດ້ວຍເຄື່ອງວັດແທກແສງທີ່ ເໝາະ ສົມ, ໃຊ້ຕົວກອງຈາກຊັ້ນໃຕ້ດິນເປົ່າເພື່ອ ກຳ ນົດເຄື່ອງມືທີ່ສູນ. ກວດແກ້ການອ່ານແຕ່ລະຫົວໂດຍການຫັກລົບການອ່ານທີ່ບໍ່ມີທາດ enzyme ທີ່ ເໝາະ ສົມ, ແລະບັນທຶກມູນຄ່າທີ່ໄດ້ຮັບມາເປັນ AU.

ການໂອນເສັ້ນໂຄ້ງຂະ ໜາດ ມາດຕະຖານ 100.0 ມລກຂອງ L-tyrosine, chromatographic-grade ຫຼືທຽບເທົ່າ (ບໍລິສັດ Aldrich Chemical Co), ເມື່ອແຫ້ງມາເປັນນ້ ຳ ໜັກ ທີ່ບໍ່ຊ້ ຳ, ກັບໄຟປະລິມານ 1000 ມລ. ລະລາຍໃນ 60 ມລຂອງ 0,1 N ກົດ hydrochloric. ໃນເວລາທີ່ລະລາຍຫມົດ, ເຈືອຈາງວິທີແກ້ໄຂປະລິມານດ້ວຍນ້ ຳ, ແລະປະສົມຢ່າງລະອຽດ. ວິທີແກ້ໄຂນີ້ມີ tyrosine 100 µg ໃນ 1.0 ມລ. ກະກຽມສາມມາດຕາສ່ວນເພີ່ມເຕີມຈາກວິທີແກ້ໄຂຫຼັກຊັບນີ້ເພື່ອບັນຈຸ 75.0, 50.0, ແລະ 25.0 µg ຂອງ tyrosine ຕໍ່ລິດ. ກຳ ນົດການດູດຊືມຂອງສີ່ວິທີແກ້ໄຂທີ່ 275 nm ໃນຈຸລັງ 1 ຊມໃສ່ກ້ອງສ່ອງທາງໄກທີ່ ເໝາະ ສົມທຽບກັບ 0,006 N hydrochloric acid. ການກະກຽມແຜນການຂອງການດູດຊືມທຽບກັບຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງ tyrosine.

ການຄິດໄລ່ທາດໂປຼຕີນຈາກເປັນດ່າງ
ໜ່ວຍ ໜຶ່ງ ທີ່ມີໂປຣຕີນຈາກເຊື້ອແບັກທີເຣັຍ (PC) ຖືກ ກຳ ນົດເປັນ ຈຳ ນວນຂອງເອນໄຊທີ່ຜະລິດເທົ່າກັບ 1.5 µg / mL ຂອງ L-tyrosine ຕໍ່ນາທີພາຍໃຕ້ເງື່ອນໄຂຂອງການຍຶດ.
ຈາກເສັ້ນໂຄ້ງມາດຕະຖານ, ແລະໂດຍການຕີຄວາມ ໝາຍ, ກຳ ນົດການດູດຊືມຂອງວິທີແກ້ໄຂທີ່ມີຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງ 60 µg / ມລ. ຕົວເລກທີ່ໃກ້ຄຽງກັບ 0.0115 ຄວນໄດ້ຮັບ. ແບ່ງມູນຄ່າຕີຄວາມ ໝາຍ ໂດຍ 40 ເພື່ອໃຫ້ໄດ້ຮັບການດູດຊືມທຽບເທົ່າກັບວິທີແກ້ໄຂທີ່ມີຄວາມເຂັ້ມຂອງ tyrosine 1.5 ofg / mL, ແລະບັນທຶກມູນຄ່າທີ່ໄດ້ຮັບດັ່ງ AS
ຄິດໄລ່ກິດຈະ ກຳ ຂອງການກະກຽມ enzyme ຕົວຢ່າງໂດຍສົມຜົນ

PC / g = (AU / AS) × (22 / 30W)

ໃນນັ້ນ 22 ແມ່ນປະລິມານສຸດທ້າຍ, ໃນ mL, ຂອງປະສົມຕິກິຣິຍາ; 30 ແມ່ນເວລາ, ໃນນາທີ, ຂອງປະຕິກິລິຍາ; ແລະ W ແມ່ນນ້ ຳ ໜັກ, ໃນ g, ຂອງຕົວຢ່າງເດີມທີ່ເອົາມາ.

ການຫຸ້ມຫໍ່ແລະການເກັບຮັກສາຂອງທາດໂປຼຕີນຈາກ Alkaline

ຖົງຫຸ້ມຫໍ່ອາຫານແຂງ, 25 ກິໂລ / ຖັງ.

Alkaline Protease ຄວນເກັບຮັກສາໄວ້ໃນບ່ອນແຫ້ງ, ເຢັນແລະມີອາກາດຖ່າຍເທດີຢູ່ຫ່າງຈາກແສງແດດ, ຄວາມຮ້ອນ.

ການຈ່າຍເງິນ:T / T, Paypal, Western Union, ການຮັບປະກັນດ້ານການຄ້າຂອງ Alibaba, VISA, MasterCard, ການກວດສອບອີເລັກໂທຣນິກ, ການຈ່າຍເງິນຕໍ່ມາ, LC ແລະອື່ນໆ.